永生化人口腔黏膜上皮細(xì)胞

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

種屬：人源（Homo sapiens）

細(xì)胞來源：口腔（Oral cavity）

疾病： 正常（Normal）

培養(yǎng)環(huán)境 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

完培配置：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系；推薦使用HAKATA培養(yǎng)基，W-P-500;（聯(lián)系慧穎市場(chǎng)部）

生長(zhǎng)特征： 貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2傳代，貼壁部2-3分鐘

倍增時(shí)間： 每周 2 至 3 次

凍存條件： 凍存液：90%FBS ，DMSO 10%,或使用HAKATA H-W-100;

細(xì)胞接收：

1：觀察有無破損漏液情況，如有請(qǐng)拍照及時(shí)聯(lián)系客服。

2 ：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋，放入培養(yǎng)箱靜止 2

- 3小時(shí)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3 ：請(qǐng)按照細(xì)胞操作指南進(jìn)行第一次傳代凍存處理。

4 ：產(chǎn)品隨貨會(huì)附帶細(xì)胞說明書、細(xì)胞培養(yǎng)操作指南。

5 ：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?，可隨時(shí)聯(lián)系客服

6.收到后，培養(yǎng)條件(完培配置)需跟保持一致，如有變動(dòng)銷售另行告知

僅限于科學(xué)研究，不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

操作步驟：

貼壁細(xì)胞接收后的處理：

1. 收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-4h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損 、有液溢出及細(xì)胞有污染 ，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們

2. 靜置完成后，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài) ，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10x ，20x)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù) 。

3. 貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在379C培養(yǎng)箱中放置2-3h ，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況 。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基 (若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收 ，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中)加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL ，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理 。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收 。

備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞 。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。

細(xì)胞復(fù)蘇：

貼壁細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代、凍存步驟：

1. 貼壁細(xì)胞復(fù)蘇:從液氮灌中或-80℃C冰箱中查找到需要復(fù)蘇的細(xì)胞，水浴鍋提前打開預(yù)熱 37℃℃1)將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍;

2.加入到含4-6mLwanquan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。

3.棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞 。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8m!培養(yǎng)基接種于T25 培養(yǎng)瓶中(或6cm 皿中) ，培養(yǎng)guo夜，第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度 。

4. 貼壁細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90% ，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

5.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次;

6.加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于 37°℃培養(yǎng)箱中消化2-3min，然后在顯微鏡 下觀察細(xì)胞消化情況 ，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后 ，加5ml以上含10%血清的wanquan培養(yǎng)基終止消化;3)輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出至離心管中，1000rpm離心3-5min ，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mLwanquan培養(yǎng)基后吹勻;4)按 5-6mL/瓶補(bǔ)加wanquan培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按 1:2到 1:3的比例分到新的含 6-8mLwanquan培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中 。

7. (傳代兩個(gè)T25或者兩個(gè)6cm的皿)

貼壁細(xì)胞凍存:

1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的 凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1x10 6~1x107個(gè)活細(xì)胞/ml;

2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1m(凍存液含1x10^6~1x107個(gè)活細(xì) 胞/ml分配到-個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱 、代數(shù) 、日期等信息;

3. 按凍存數(shù)量加入無血清凍存波后直接放-80℃冰箱guo夜 ，后續(xù)可轉(zhuǎn)入液氨罐中長(zhǎng)期保存 。