人真皮毛乳頭細胞永生化

細胞接收處理流程：

1：觀察有無破損漏液情況 ，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài) ，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜止2-3小時穩(wěn)定 細胞狀態(tài)。

3：請按照細胞操作指南進行次傳代凍存處理。

4：產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南、細胞鑒定、支原體檢測報告。

5：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?，可隨時聯(lián)系客服；轉(zhuǎn)至技術(shù)支持。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-4h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）靜置完成后，請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10× , 20×) 各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）。

4）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可

以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收 。

5）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。    收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

細胞處理：

1. 復蘇細胞：從液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞，水浴鍋提前打開預熱 37℃。

1) 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；

2) 加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。

3) 棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基接種于 T25 培養(yǎng)瓶中（或 6cm 皿中），

培養(yǎng)過夜，第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2. 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次；

2) 加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 2-3min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后，加 5ml 以上含 10%血清的培養(yǎng)基終止消化；

3) 輕輕吹打細胞，脫落后吸出至離心管中，1000rpm離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻；

4) 按 5-6mL/瓶補加培養(yǎng)基，將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中。

（即 1 個 T25 傳代接種至 2~3 個 T25 或者 2~3 個直徑為 6cm 的培養(yǎng)皿）

3. 細胞凍存：

1）細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1× 10^6~1×107個活細胞/ml.

2）1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每 1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、 日期等信息。

3） 按凍存數(shù)量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜，后續(xù)可轉(zhuǎn)入液氮罐中長期保存。